Иммуногистохимические тесты

Описание

Иммуногистохимическое исследование хронического эндометрита с типированием плазматических клеток (CD-138) — исследование биоптата ткани, меченого антителами, под микроскопом. Анализ выполняется для проведения дифференциальной диагностики хронического эндометрита.
ИГХ-исследования проводят после выполнения гистологического исследования.Иммуногистохимическое исследование  
Вид морфологического исследования тканей, полученных в ходе биопсии, и меченых специфическими антителами. В основе метода лежит принцип взаимодействия «антиген-антитело». Ткань, в которой происходит патологический процесс, экспрессирует антигены. При нанесении на образец ткани антител, образуется комплекс антиген-антитело. Благодаря меткам, он становится доступным для визуализации. Врач-патоморфолог изучает количество клеток, окрашенных маркёром. Он определяет в исследуемой ткани локализацию клеток, гормонов и их рецепторов, ферментов, иммуноглобулинов, компонентов клеток и отдельных генов.Хронический эндометрит
Хронический эндометрит — это клинико-морфологический синдром, при котором возникают функциональные и структурные изменения слизистой полости матки вследствие повреждения клеток эндометрия инфекционным агентом. Хронический эндометрит может протекать без отсутствия клинических признаков. Он часто является причиной нарушения репродуктивной функции, вплоть до бесплодия.
По этиологическому фактору хронический эндометрит бывает специфическим (с выявлением инфекции) или неспецифическим (полимикробной ассоциации).Факторы риска развития хронического эндометрита: 

• Инфекционно-воспалительный процесс в малом тазу.
• Наличие внутриматочной спирали.
• Инфекции влагалища и шейки матки.
• Бактериальный вагиноз.
• Деформации полости матки с нарушением циклического отторжения эндометрия.
• Инвазивные вмешательства в полость матки.
• Лучевая терапия в области органов малого таза.
• Раннее начало половой жизни.
• Курение.
• Употребление алкоголя.

В результате воздействия патологического фактора развивается воспалительная реакция, которая является универсальным способом защиты в организм. Про хроническом эндометрите возникает воспаление в интерстициальной ткани. Оно проявляется инфильтраций макрофагами, лимфоцитами, плазматическими клетками и фиброзом ткани. На местном уровне наблюдается активация цитокинов-медиаторов воспаления. Цитокины способствуют дополнительному привлечению в зону воспаления лимфоцитов, активации нейтрофилов и макрофагов. В результате воспаления наблюдается повреждение эпителия, нарушение его пролиферации и нормальной циклической трансформации.
«Золотой стандарт» в диагностике хронического эндометрита это гистологическое исследование.
Диагноз выставляется врачом-патоморфологом на основании изучения биоптатов эндометрия. Морфологически заболевание проявляется инфильтрацией стромы эндометрия плазматическими клетками.
В настоящее время воспалительные заболевания органов малого таза относят к аутоиммунному процессу, который протекает как самоподдерживающаяся патологическая реакция.
Иммуногистохимическое исследование определяет характер иммунологических нарушений. Анализ выявляет пациенток с аутоиммунным воспалением и аутоиммунным ответом в эндометрии, что определяет тактику их ведения.CD-138
Это маркёр плазматических клеток. Его определение показано при неполной морфологической картине хронического эндометрита.Показания к проведению ИГХ-исследования:

• бесплодие;
• хронический эндометрит;
• воспалительные процессы слизистой полости матки.

Подготовка
Подготовка определяется лечащим врачом.
Диагностическое выскабливание слизистой оболочки матки рекомендовано проводить в среднюю и позднюю фазу пролиферации — на 7–10-й день менструального цикла.
Материалом для исследования являются парафиновый блок и предметные стёкла. В случае если материалом является образец ткани в растворе формалина, дополнительно должна быть выполнена услуга изготовления стёкол.
При проведении гистологического исследования в сторонней лаборатории необходимо предоставить протокол гистологического исследования.
Интерпретация результатов
Ответ выдаётся в виде описания микропрепарата, применяемых красителей и заключения. Заключение может интерпретировать только врач, направивший на проведение исследования.

Перспективы

Перспективы, ИГХ, можно объединить в две группы:

• Обнаружение патологии;
• Лекарственная чувствительность.

Диагностические цели таковы:

• Окончательный вариант диагностического анализа;
• Уточнение степени раковой опухоли;
• Дифференцирование образований и процессов, с опухолями не связанными;
• Различение опухолевых процессов, присутствующих в организме.

Некоторые возможности с точки зрения препаратной чувствительности:

• Рецепторы стероидных гормонов;
• Белок Her2/neu;
• Рецепторы соматостатина 2А и 5 типов;
• PD-L1;
• Индекс пролиферативной активности (Ki-67);
• ALK, некоторые иные.

УРОТЕЛИАЛЬНЫЙ РАК: методы определения экспрессии PD-L1

Стандартом терапии 1 линии пациентов с раком уротелия продолжают быть химиотерапевтические режимы на основе цисплатина . Однако по данным литературы до 50% больных не подходят для назначения данной терапии . Ситуация с лечением изменилась с появлением иммунотерапевтических анти-PD-L1 препаратов . Сейчас для назначения иммунотерапии в первой линии распространенного уротелиального рака пациентам, которые не могут перенести ципсплатин, рекомендовано проведение PD-L1 диагностики. Для остальных групп пациентов диагностика PD-L1 не требуется (при невозможности проведения любой платиносодержащей химиотерапии и у пациентов с прогрессированием заболевания в ходе или после окончания любой платиносодержащей химиотерапии или в течение 12 месяцев после неоадъювантной или адъювантной химиотерапии).

Экспрессия PD-L1 определяется методом иммуногистохимии. Для этих целей используется диагностический набор Ventana PD-L1 (SP142) Assay (Ventana Medical Systems, Inc.). Для тестирования используется ткань опухоли, фиксированная в формалине и залитая в парафиновый блок. PD-L1 статус у пациентов с уротелиальной карциномой определяется как часть площади опухоли, занятая PD-L1 экспрессирующими иммунными клетками, инфильтрирующими опухоль, любой интенсивности окрашивания.

Рисунок 3. Окрашивание опухолевых и иммунокомпетентных клеток, инфильтрирующих опухоль, с помощью ИГХ-анализа VENTANA PD-L1 (SP142).

Рисунок 4. Окрашивание иммунокомпетентных клеток, инфильтрирующих опухоль, с помощью ИГХ-анализа VENTANA PD-L1 (SP142).

Определение уровня экспрессии PD-L1 иммуногистохимическим методом позволяет выделить группу пациентов для назначения анти-PD-L1 терапии.

Виды

Выделяют два метода ИГХ-изучения – прямой и непрямой.

При прямом нужен один вид молекул-антител. Молекулы эти взаимодействуют с молекулой, которая является мишенью. Если эта патогенная частица присутствует в ткани и есть реакция, опухолевая ткань окрашивается.

Чаще применяют непрямой вид. Здесь необходимы две cellula. Первая начинает взаимодействовать с частицей атипичной, вторая вступает во взаимодействие с полученным комплексом «атипичная cellula – антитело». Маркер, который изменил свой цвет, связывают со второй частицей.

У непрямого ИГХ-изучения есть неоспоримое преимущество – чувствительность его более выше.

Еще одно преимущество в том, что для проведения диагностики по второму виду, нужно ограниченное количество молекулярного материала.

ТНРМЖ: методы определения экспрессии PD-L1

Тройной негативный рак молочной железы – самая агрессивная форма среди рака молочной железы . Традиционно применяемая химиотерапия не позволяла достичь значимого увеличения продолжительности жизни свыше медианы в 18 месяцев. Появление анти-PD-L1 терапии, с одной стороны, позволило преодолеть медиану общей выживаемости в 2 года, а с другой стороны – для назначения терапии необходимо выделить группу PD-L1 позитивных пациентов. В отличие от уротелиального рака, назначение анти-PD-L1 терапии обязательно требует тестирования пациенток с тройным негативным раком молочной железы.

Какой метод используется для определения экспрессии PD-L1 у пациентов с ТНРМЖ?

При определении статуса PD-L1 для решения вопроса об иммунотерапии важно выбрать оптимальный метод. Тест VENTANA PD-L1 (SP142) позволяет идентифицировать пациентов с тройным негативным раком молочной железы (ТНРМЖ), которые могут получать анти-PD-L1 терпию

Ткани пациентов с ТНРМЖ, окрашенные с использованием теста VENTANA PD-L1 (SP142), оценивают по окрашиванию инфильтрирующих опухоль иммунных клеток (IC). IC – это иммунные клетки, присутствующие в интратуморальной и прилегающей перитуморальной строме. В это понятие включены лимфоциты, макрофаги, дендритные клетки и полиморфноядерные лейкоциты. IC оценивают как долю области опухоли, которую занимают иммунные клетки с окрашиванием PD-L1 любой интенсивности.

Как происходит забор материала?

Биопсия — хирургический метод, с помощью которого извлекается образец ткани из области поражения. Биопсия является одним из основных способов диагностики в комплексе , рентгена, , .

Данный метод позволяет диагностировать гепатит, патологические процессы щитовидной железы и толстой кишки, , гинекологические и урологические заболевания.

В процессе хирургического вмешательства могут быть полностью или частично извлечены:

• соединительные и мышечные ткани;
• внутренние органы;
• кожные покровы;
• слизистая ЖКТ и бронхов;
• лимфоузлы;
• костный мозг;
• простата и шейка матки.

Существует несколько основных способов взятия биоматериала:

• экзициозный (полное иссечение новообразования или тканей органа);
• инцизионный (частичное извлечение органа или опухоли);
• пункционный (сбор материала с помощью прокола тонкой полой иглой);
• аспирационный (использование тонкой иглы для извлечения образца);
• трепан-биопсия (забор костного образца толстой иглой);
• щипцовой (отщепление части ткани или органа);
• кюретаж (методика удаления отложений).

Биопсия проводится в открытой форме, при которой материал для исследования получают на основе мазка и смыва. Для процедуры может использоваться также рентгенография, УЗИ. В зависимости от того, производится ли только забор образца или полное иссечение органа, биопсия носит диагностический или лечебный характер. Данные лабораторного исследования используются в гистологии и цитологии.

О программе определения экспрессии PD-L1

• Тестирование в рамках программы проводится на всей территории страны.
• Отправка материала и тестирование проводятся бесплатно для врачей, лечебных учреждений и пациентов.

Список литературы:

1. Zitvogel L, et al. Tumor Immunol. 2006; 6(10): 715-727. 2. Vesely MD, Schreiber RD. Ann NY Acad Sci. 2013; 1284(1): 1-5.
2. May KF Jr, et al. In: Prendergast GC et al. Cancer Immunotherapy. 2nd ed. Elsevier; 2013: 101-113.
3. Pardoll DM. Nat Rev Cancer. 2012; 12(4): 252-264. 2. McDermott DF, Atkins MB. Cancer Medicine. 2013; 2(5): 662-673.
4. Garon EB, et al. N Engl J Med. 2015; 372(21): 2018-2028.
5. Mino-Kenudson M. Programmed cell death ligand-1 (PD-L1) expression by immunohistochemistry: could it be predictive and/or prognostic in non-small cell lung cancer? Cancer Biol Med. 2016; 13: 157-170. doi: 10.20892/j.issn.2095-3941.2016.0009.
6. Dako Denmark A/S. PD-L1 IHC 22C3 pharmDx Interpretation Manual. 2. Dako Denmark A/S. Immunohistochemical Staining Methods. Sixth Edition, 2013.
7. Saleh K, Khalifeh-Saleh N, Kourie HR. Is it possible to rechallenge with PD-1/PD-L1 inhibitors after progression? Immunotherapy. Vol. 10(5), P.345-347.
8. Ghiotto M, Gauthier L, Serriari N, et al. PD-L1 and PD-L2 differ in their molecular mechanisms of interaction with PD-1. Int Immunol. Vol. 22(8), P.651-660.
9. Sharpe AH, Pauken KE. The diverse functions of the PD1 inhibitory pathway. Nat Rev Immunol. Vol. 18(3), P.153-167.
10. Ratcliffe MJ, et al. Clin Cancer Res. 2017; 23(14): 3585-3581.
11. von der Maase H, Sengelov L, Roberts JT, et al. Long-term survival results of a randomized trial comparing gemcitabine plus cisplatin, with methotrexate, vinblastine, doxorubicin, plus cisplatin in patients with bladder cancer. J Clin Oncol. Vol. 23(21), P.4602-4608.
12. Hirsch FR, Bunn PA. Lancet Oncol. 2009; 10(5): 432-433.
13. Kwak EL, et al. N Engl J Med. 2010; 363(18): 1693-1703.
14. Sonpavde G, Galsky MD, Latini D. Cisplatin-ineligible and chemotherapy-ineligible patients should be the focus of new drug development in patients with advanced bladder cancer. Clin Genitourin Cancer. Vol. 12(2), P.71.
15. Reck M, et al. N Engl J Med. 2016; 375(19): 1823-1833.
16. Garon EB, et al. N Engl J Med. 2015; 372(21): 2018-2028.
17. De Santis M, Bellmunt J, Mead G, et al. Randomized phase II/III trial assessing gemcitabine/carboplatin and methotrexate/carboplatin/vinblastine in patients with advanced urothelial cancer who are unfit for cisplatin-based chemotherapy: EORTC study 30986. J Clin Oncol. Vol. 30(2), P.191-199.
18. Hirsch FR, et al. J Thoracic Oncol. 2017; 12(2): 208-222.
19. Medical Systems Inc. VENTANA PD-L1 (SP142) Assay Interpretation Guide. pretation Guide. Реагент Ventana PD-L1 (SP142) IHC Assay для иммуногистохимической оценки лиганда-1 белка программируемой смерти в in vitro диагностике к иммуностейнерам автоматическим серии Ventana BenchMark №РЗН 2020 /9554 от 21.01.2020.
20. Melosky B, Blais N, Cheema P, at al. Standardizing biomarker testing for Canadian patients with advanced lung cancer. Curr Oncol. 2018 Feb; 25(1): 73-82.
21. Ratcliffe MJ, et al. Clin Cancer Res. 2017; 23(14): 3585–3581.
22. Ilie M, et al. PLoSONE. 2017; 12(8): 1.
23. Balar A.V., Dreicer R., Loriot Y. et al. Atezolizumab (atezo) in first-line cisplatin-ineligible or platinum-treated locally advanced or metastatic urothelial cancer (mUC): Long-term efficacy from phase 2 study IMvigor210. J Clin Oncol 36, 2018 (suppl; abstr 4523).
24. Herbst RS et al. Lancet. 2016;387(10027):1540–1550.

Войтив базу данных

Для того, чтобы отправить материал на диагностику, вы должны быть зарегистрированным пользователем. Если у вас уже есть логин и пароль, то повторная регистрация не требуется.

 
Регистрацияв программе

Если вы новый пользователь, пожалуйста, пройдите процедуру регистрации.

Расшифровка результатов

По результатам гистологического исследования оцениваются размеры взятого материала, его цвет, свойства и концентрация, а также патологические изменения в тканях, их атипичного роста и так далее.

Недостаточное количество биоматериала или отсутствие в нем патологии может дать ложноположительный результат, поэтому необходимо соблюдать правила забора исследуемого образца.

Изучение результатов гистологии входит в обязанности патологоанатома или патоморфолога. Они изучают историю болезни пациента и на основе клинических данных составляют заключение. В случае однозначных итогов лабораторных тестов, специалисты ставят окончательный диагноз. Спорные случаи врачи обсуждают на консилиуме.

Диагноз устанавливается согласно нормам ВОЗ или министерства здравоохранения страны.

Длительность гистологического исследования обычно длится от 1 недели, если образец был взят из мягких тканей и около 2 недель, если это образец костных тканей.

Транспортировка биоматериала сопровождается записью в специальном журнале и производится в тщательно упакованной таре ответственным лицом для передачи лаборанту.

• Инфекционные исследования
• Общеклинические исследования

Применение технологии в репродуктивной медицине

Иммуногистохимия в репродуктивной медицине применяется для диагностики причин бесплодия и оценки потенциальной эффективности ЭКО. Известно, что беременность при применении вспомогательных репродуктивных технологий наступает у 35–45 % пациенток после первой попытки. Около 30 % пациенток имеют многократные неудачи, причины которых различны, в том числе неблагоприятное состояние эндометрия.

Долгое время для изучения патологии эндометрия использовался гистологический метод исследования. Однако он не позволял достоверно оценить рецептивную способность эндометрия, что породило потребность в поиске более информативных методов диагностики. Одним из них стала иммуногистохимия, которую в настоящее время используют в следующих целях:

1. Исследование структурных особенностей эндометрия.
2. Определение способности эндометрия к имплантации.
3. Определение негативных факторов наступления беременности, например, гиперэкспрессии альфа-эстрогеновых рецепторов в железистых и стромальных клетках в среднелютеиновую фазу, снижение прогестерон+ стромальных клеток.
4. Определение благоприятных факторов наступления беременности — оптимальное соотношение прогестероновых и эстрогеновых рецепторов, количество эндометриальных эпителиоцитов с пиноподиями более 50 %.
5. Оценка восприимчивости эндометрия к гормонам. На основании полученной информации корректируют дозу гормональных препаратов, используемых на этапах планирования и проведения ЭКО.
6. Определение иммунокомпетентных клеток-киллеров, препятствующих наступлению беременности.

Экспертное мнение врача

Сараева О.В.
Акушер -гинеколог, репродуктолог. Гинеколог-эндокринолог. Врач высшей категории. Кандидат медицинских наук.

Иммуногистохимия представляет собой гораздо более информативный метод диагностики, чем классическая гистология. Методика позволяет с точностью определить состояние эндометрия и выявить причины бесплодия или множественных неудач ЭКО. Кроме того, она может использоваться в прогнозировании результатов экстракорпорального оплодотворения. Несмотря на относительную техническую сложность реализации, иммуногистохимические исследования получают все большее распространение в сфере репродуктивной медицины.

Что представляет собой лиганд программируемой клеточной гибели PD-L1?

• PD-L1 – трансмембранный белок, лиганд к рецептору PD-1. При связывании с рецептором PD-1 на цитотоксических лимфоцитах блокирует их цитотоксическую активность
• В норме участвует в физиологическом механизме подавления аутоиммунных реакций
• При экспрессии PD-L1 опухолевыми клетками данный лиганд участвует в механизмах ускользания опухоли от иммунного контроля (рис.1)

PD-L1 – лиганд рецептора программируемой клеточной гибели 1 (PD-1). Это трансмембранный белок с молекулярной массой 40 кДа, экспрессируемый на T- и B-лимфоцитах, NK-клетках, дендритных клетках, макрофагах, мезенхимальных стволовых клетках. PD-L1 способен связываться не только с рецептором PD-1, но и обладает сродством к CD80 (B 7.1) – белку, находящемуся на поверхности дендритных клеток, активированных B-клеток и моноцитов, который стимулирует активацию и выживаемость Т-лимфоцитов путем взаимодействия с CD28 на их поверхности. Лиганд PD-L1 способен угнетать этот процесс путем конкурентного связывания с CD80. На рисунке 1 представлены межклеточные взаимодействия (активирующие и ингибирующие сигналы) между Т-лимфоцитом и антигенпрезентирующей клеткой.

Рисунок 1. PD-1/PD-L1 сигнальный каскад в межклеточном взаимодействии иммунокомпетентных клеток. При связывании лиганда PD-L1 (лиганд рецептора программируемой клеточной смерти 1, также называемого PD-1) с рецепторами PD-1 и B7.1, находящимися на Т-лимфоцитах, происходит угнетение цитотоксической активности Т-лимфоцитов.

Как проводится иммуногистохимия

Для проведения исследования требуется фрагмент эндометрия, который получают во время проведения биопсии (раздельного диагностического выскабливания или пайпель-биопсии). Этот материал помещается в забуференный формалин и направляется в лабораторию, где проходит несколько этапов обработки:

1. Фиксация и проводка. Эти процедуры необходимы, чтобы сохранить структуру ткани максимально неповрежденной.
2. Изготовление парафиновых блоков. Подготовленный материал заливают парафином. С этого момента блок может храниться неограниченное количество времени, не теряя своих свойств. При необходимости, в любой момент из него могут быть приготовлены гистологические препараты.
3. Изготовление гистологических препаратов. Ткань нарезают с помощью микротома на тонкие пластинки, толщиной несколько микрометров (это в десятки раз меньше, чем толщина волоса), фиксируют на стекле и окрашивают красителями для гистологического и иммуногистохимического исследования.
4. На финальной стадии препараты оценивает врач-патоморфолог.

В заключении выдаются результаты как гистологического, так и иммуногистохимического исследования. На этом основании лечащий врач выбирает оптимальный метод лечения.

Как забеременеть в 35?

По рекомендациям ВОЗ оптимальным возрастом для беременности является промежуток от 20 до 30 лет, однако по разным причинам женщины могут планировать ее позже.

Лечение бесплодия у женщин

В наше время бесплодие является не только медицинской, но и социальной проблемой.

Повышенный уровень тестостерона у женщин

Тестостерон — один из главных мужских гормонов, однако в определенном количестве он вырабатывается яичниками и надпочечниками у женщин.

Стимуляция овуляции

Суть

Иммуногистохимия (иначе ее называют иммуногистохимический анализ) представляет собой исследование, цель которого состоит в обнаружении патогенных клеток в тканевых образцах. Для этой цель используют молекулы, вырабатываемые иммунной системой.

Само название действия тройственное, в него уместились слова, которые сами по себе являются названиями определенных направлений в науке и практике:

• Иммунология;
• Гистология;
• Химия.

Реактивы, которые применяют, насыщены клетками (cellula), структура которых способна антигены к себе притягивать.

Для удобства, наглядности и контроля используют ферменты, начинающиеся проявляться при реакции положительной.

ИГХ – исследование дополнительное с точки зрения диагностики. К нему прибегают в случае отсутствия результатов гистологии, а также для уточнения на уровне молекул характеристик опухоли.

ИГХ имеет практическое применение при:

• Характеристике клеток;
• Анализе внутриклеточных процессов и уникальности синтеза, в клетках происходящего;
• Анализе гормонов и их рецепторов.